生物工程實驗指南

目 錄
**篇 實 驗 部 分
實驗一 磷脂的分離純化3
實驗1-1 卵磷脂的提取3
實驗1-2 薄層層析法檢測卵磷脂5
實驗二 紅霉素的提取分離及效價測定9
實驗2-1 有機溶劑萃取法制備硫氰酸紅霉素9
實驗2-2 大網(wǎng)格樹脂吸附法提取紅霉素12
實驗2-3 無機鹽對再生型雙水相體系萃取紅霉素分配系數(shù)的影響15
實驗2-4 比色法測定紅霉素效價18
實驗三 木姜葉柯黃酮的提取及測定22
實驗3-1 超聲波輔助法提取木姜葉柯黃酮22
實驗3-2 乙醇回流法提取木姜葉柯黃酮24
實驗3-3 微波輔助法提取木姜葉柯黃酮26
實驗3-4 木姜葉柯黃酮的含量測定29
實驗四 超臨界法萃取青蒿素及純度測定32
實驗4-1 利用超臨界CO2 流體萃取青蒿素32
實驗4-2 HPLC 法測定青蒿素純度35
實驗五 番茄紅素的提取分離及含量測定38
實驗5-1 蔬菜中番茄紅素的提取分離38
實驗5-2 分光光度法測定番茄紅素的含量40
實驗六 咖啡因的提取分離及測定43
實驗6-1 乙醇萃取法提取分離咖啡因43
實驗6-2 HPLC 法檢測咖啡因含量45
實驗七 微生物的分離純化和鑒定48
實驗7-1 從土壤中分離和純化微生物48
實驗7-2 利用細菌16S rDNA 序列分析鑒定其屬51
實驗7-3 細菌的生理生化反應(yīng)56
實驗7-4 細菌生長曲線的測定59
實驗7-5 真菌ITS 序列分析鑒定61
實驗八 環(huán)境因素對微生物生長的影響65
實驗九 小鼠TLR2 基因的克隆68
實驗9-1 小鼠肝臟總RNA 提取68
實驗9-2 RT-PCR、擴增產(chǎn)物純化與瓊脂糖凝膠電泳鑒定71
實驗9-3 RT-PCR 產(chǎn)物克隆75
實驗9-4 轉(zhuǎn)化子的篩選及PCR 鑒定77
實驗9-5 重組質(zhì)粒提取與酶切鑒定80
實驗十 AFLP 分子標(biāo)記實驗技術(shù)84
實驗10-1 基因組DNA 的制備、酶切及接頭連接84
實驗10-2 PCR 擴增及產(chǎn)物電泳鑒定87
實驗十一 酸性磷酸酯酶的特性分析93
實驗11-1 酶促反應(yīng)進程曲線的制作和酶活力測定93
實驗11-2 酸性磷酸酯酶的Km 和Vmax 測定98
實驗11-3 離子交換層析法純化酸性磷酸酯酶101
實驗11-4 SDS-PAGE 測酸性磷酸酯酶的相對分子質(zhì)量105
實驗十二 酵母蔗糖酶的提取與活性功能基團的化學(xué)修飾 111
實驗12-1 酵母蔗糖酶的提取、分離與純化 111
實驗12-2 酵母蔗糖酶的包埋及固定化酶活性測定114
實驗12-3 酵母蔗糖酶活性功能基團的化學(xué)修飾117
實驗十三 產(chǎn)纖維素酶微生物篩選、產(chǎn)酶條件優(yōu)化、纖維素酶基因的克隆分析119
實驗13-1 產(chǎn)纖維素酶微生物的分離與初步鑒定120
實驗13-2 產(chǎn)纖維素酶菌種的篩選與保藏122
實驗13-3 酶活測定與傳代保藏124
實驗13-4 產(chǎn)纖維素酶菌種的紫外誘變育種127
實驗13-5 正交試驗設(shè)計優(yōu)化產(chǎn)纖維素酶菌種的產(chǎn)酶條件129
實驗13-6 產(chǎn)纖維素酶細菌菌株酶基因克隆分析133
實驗十四 酶的固定化、酶傳感器、酶反應(yīng)器及其應(yīng)用137
實驗14-1 酶的固定化及酶傳感器的制備及應(yīng)用137
實驗14-2 酶反應(yīng)器設(shè)計及酪蛋白水解物的制備139
實驗14-3 酶法澄清蘋果果汁加工工藝優(yōu)化142
實驗十五 多克隆抗體的純化與檢測145
實驗15-1 兔血清的分離145
實驗15-2 多克隆抗體的硫酸銨分級粗純化148
實驗15-3 抗體的蛋白質(zhì)G 親和純化150
實驗十六 利用畢赤酵母制備重組蛋白154
實驗16-1 酵母轉(zhuǎn)化子的活化及少量培養(yǎng)154
實驗16-2 重組茯苓免疫調(diào)節(jié)蛋白的鎳親和純化156
實驗16-3 重組茯苓免疫調(diào)節(jié)蛋白的DEAE 離子交換純化158
實驗十七 外源基因在哺乳動物細胞中的表達162
實驗17-1 脂質(zhì)體介導(dǎo)的外源基因細胞轉(zhuǎn)染162
實驗17-2 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測外源基因在細胞中的表達164
實驗十八 基于細胞水平的藥物篩選169
實驗18-1 MTT 法檢測藥物對細胞活力的影響169
實驗18-2 平板克隆形成實驗檢測藥物對細胞增殖的影響171
實驗18-3 劃痕實驗檢測藥物對細胞遷移的影響173
實驗十九 淀粉質(zhì)原料乙醇發(fā)酵175
實驗19-1 淀粉質(zhì)原料乙醇搖瓶發(fā)酵175
實驗19-2 乙醇的蒸餾178
實驗19-3 發(fā)酵液中乙醇含量的檢測181
實驗二十 檸檬酸發(fā)酵184
實驗20-1 檸檬酸搖瓶發(fā)酵185
實驗20-2 檸檬酸的提取——檸檬酸鈣的制備187
實驗20-3 檸檬酸的檢測189
實驗二十一 α-淀粉酶發(fā)酵193
實驗21-1 α-淀粉酶搖瓶發(fā)酵193
實驗21-2 α-淀粉酶活力測定195
實驗二十二 青霉素發(fā)酵200
實驗22-1 青霉素搖瓶發(fā)酵200
實驗22-2 抗生素效價評定203
實驗二十三 茯苓多糖發(fā)酵及檢測205
實驗23-1 茯苓多糖搖瓶發(fā)酵205
實驗23-2 茯苓多糖的提取208
實驗23-3 硫酸-苯酚法測定茯苓多糖210
實驗二十四 植物組織培養(yǎng)213
實驗24-1 MS 培養(yǎng)基母液和培養(yǎng)基的配制213
實驗24-2 外植體滅菌、接種與培養(yǎng)218
實驗24-3 繼代培養(yǎng)221
實驗24-4 愈傷組織再分化芽的培養(yǎng)223
實驗24-5 生根培養(yǎng)225
實驗24-6 試管苗的馴化與移栽230
實驗24-7 植物細胞懸浮培養(yǎng)233
第二篇 實 訓(xùn) 部 分
實訓(xùn)一 機械攪拌式發(fā)酵罐綜合實訓(xùn)239
實訓(xùn)1-1 發(fā)酵罐結(jié)構(gòu)的認(rèn)知239
實訓(xùn)1-2 發(fā)酵罐的滅菌240
實訓(xùn)二 物料的粗粉碎與超微細粉碎243
實訓(xùn)2-1 粗粉碎243
實訓(xùn)2-2 超微細粉碎244
實訓(xùn)三 產(chǎn)物分離精制綜合實訓(xùn)246
實訓(xùn)3-1 高速管式離心機246
實訓(xùn)3-2 降膜式蒸發(fā)器247
實訓(xùn)3-3 噴霧干燥249
主要參考文獻251
附錄1 常用單位換算表253
附錄2 常用AFLP 選擇性擴增引物254
附錄3 幾種植物外植體培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方255
附錄4 過濾除菌法258
附錄5 生物工程常用試劑的配制260
附錄6 常用培養(yǎng)基的配制271