生物醫(yī)學常用實驗方法

第一章 分子生物學實驗
第一節(jié) 聚合酶鏈式反應（PCR）
第二節(jié) 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）
實驗一 總RNA的提取
實驗二 逆轉(zhuǎn)錄
第三節(jié) 實時定量PCR
第四節(jié) 感受態(tài)細胞的制備
第五節(jié) 質(zhì)粒DNA小量抽提
第六節(jié) 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
第七節(jié) 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
第八節(jié) 質(zhì)粒構(gòu)建和鑒定
實驗一 酶切
實驗二 T-A克隆連接
實驗三 PCR產(chǎn)物與載體的連接
第九節(jié) 小鼠基因組DNA制備
實驗一 小鼠脾臟凋亡DNA和正常DNA制備
實驗二 小鼠尾巴組織DNA純化
第二章 細胞生物學實驗
第一節(jié) 細胞的冷凍保存與復蘇
實驗一 細胞凍存
實驗二 細胞復蘇
第二節(jié) 人外周血單個核細胞的分離和培養(yǎng)
第三節(jié) 小鼠脾臟CD4+T細胞的分離和純化
第四節(jié) 腫瘤組織細胞的分離和培養(yǎng)
第五節(jié) 小鼠骨髓樹突狀細胞（DC）的分離和培養(yǎng)
第六節(jié) 自然殺傷性（NK）細胞的分離和培養(yǎng)
第七節(jié) 細胞增殖實驗
實驗一 [3H]TdR摻入檢測細胞增殖法
實驗二 MTT比色法
實驗三 CFSE法
第八節(jié) 細胞殺傷實驗——乳酸脫氫酶釋放法測定反應細胞殺傷活性
第九節(jié) 細胞因子測定
實驗一 IL-2分泌水平檢測
實驗二 流式細胞術(shù)胞內(nèi)染色
實驗三 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）
第十節(jié) 小鼠Th17細胞的體外擴增和檢測
實驗一 小鼠Th17細胞的體外擴增
實驗二 小鼠Th17細胞的檢測
第十一節(jié) Treg細胞的誘導分化
第十二節(jié) 單克隆抗體的制備和純化——Y-19細胞上清中IgG抗體的分離純化
第十三節(jié) T細胞免疫耐受的體內(nèi)外誘導
實驗一 體外誘導T細胞的免疫耐受
實驗二 體內(nèi)誘導T細胞的免疫耐受
第三章 病毒學實驗
第一節(jié) CVB3病毒的擴增和病毒滴度測定
實驗一 CVB3的擴增
實驗二 半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量（TCID50）法
實驗三 空斑形成單位（PFU）法
第二節(jié) 登革病毒的擴增和病毒滴度測定
實驗一 登革病毒的擴增
實驗二 TCID50法測定登革病毒的病毒滴度
第三節(jié) 應用昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)進行蛋白表達
第四章 蛋白質(zhì)制備和檢測
第一節(jié) 蛋白純化
實驗一 His-tag蛋白質(zhì)純化
實驗二 GST-tag蛋白質(zhì)純化
第二節(jié) 蛋白印跡（Western blot）實驗
第三節(jié) 考馬斯亮藍染色
第四節(jié) 流式細胞儀檢測蛋白表達
實驗一 細胞懸液的制備
實驗二 紅細胞溶解
實驗三 細胞表面抗原的染色
實驗四 細胞內(nèi)抗原的染色
第五節(jié) 免疫共沉淀
第六節(jié) 凝膠電泳遷移實驗（EMSA）
第五章 病理學實驗
第一節(jié) 常規(guī)石蠟切片的制備
第二節(jié) 常規(guī)冰凍切片的制備
第三節(jié) HE染色
第四節(jié) 纖維化（Masson）染色
第五節(jié) 天狼猩紅染色
第六節(jié) 免疫組織化學染色
第七節(jié) 免疫熒光染色
第八節(jié) DAPI染色
第六章 質(zhì)譜實驗
第一節(jié) 質(zhì)譜樣品制備
實驗一 膠內(nèi)酶解
實驗二 C18除鹽小柱（StageTip）脫鹽
第二節(jié) 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀使用方法
實驗一 儀器狀態(tài)檢查
實驗二 序列編輯與樣品采集
實驗三 數(shù)據(jù)查看與數(shù)據(jù)質(zhì)量判斷
第七章 動物實驗操作及模型建立
第一節(jié) 小動物血液采集
實驗一 小鼠眼眶靜脈叢采血
實驗二 小鼠摘眼球取血
第二節(jié) 常用的小動物給藥方法
實驗一 小鼠灌胃
實驗二 鼻腔滴注給藥
實驗三 小鼠尾靜脈注射
實驗四 高壓尾靜脈注射
實驗五 小鼠腹腔注射CVB3
第三節(jié) 柯薩奇病毒性心肌炎急性感染模型的建立
第四節(jié) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠模型的建立
第五節(jié) 非清髓異基因造血干細胞移植模型的建立
第六節(jié) 過表達外源基因小鼠骨髓嵌合模型的建立
第八章 線蟲實驗
第一節(jié) 線蟲培養(yǎng)
第二節(jié) 線蟲PCR鑒定基因型
第三節(jié) 線蟲雜交
第四節(jié) 顯微注射轉(zhuǎn)基因技術(shù)
第五節(jié) 線蟲的RNA干擾技術(shù)
參考文獻