免疫學雙語實驗技術(shù)指導（第二版）

目錄
第一篇 體外抗原抗體反應
1.1 傳統(tǒng)的抗原抗體反應 3
1.1.1 凝集反應 4
實驗一 直接凝集反應——玻片凝集反應鑒定ABO血型 4
實驗二 間接凝集反應——測定類風濕因子的乳膠凝集試驗 10
實驗三 間接凝集抑制反應——測定HCG的間接乳膠凝集抑制試驗(妊娠試驗) 14
1.1.2 沉淀反應 18
實驗四 對流免疫電泳 18
實驗五 免疫電泳 23
1.1.3 補體參與的抗原抗體反應 27
實驗六 補體凝集素途徑測定 27
實驗七 補體溶血空斑試驗 32
1.2 功能性細胞因子和免疫球蛋白的檢測 39
實驗八 人血清過敏反應特異性IgE(SIgE)檢測 40
1.3 HLA分型技術(shù) 45
實驗九 PCR-SSP HLA分型技術(shù)——檢測HLA B27基因 46
第二篇 免疫細胞分離
2.1 免疫細胞的分離和純化 55
實驗十 外周血單個核細胞分離 56
實驗十一 小鼠骨髓來源巨噬細胞制備 60
實驗十二 小鼠腹腔巨噬細胞的分離 64
實驗十三 樹突狀細胞的制備 69
實驗十四 自然殺傷細胞分離 73
實驗十五 磁珠分選小鼠脾臟T細胞 82
實驗十六 尼龍棉法分離小鼠B細胞 89
實驗十七 磁珠分選B細胞 94
實驗十八 小鼠肺泡巨噬細胞的分離和純化 98
實驗十九 小鼠腸道免疫細胞獲取 103
第三篇 免疫細胞功能檢測
實驗二十 小鼠脾臟NK細胞活性檢測 115
實驗二十一 豚鼠T細胞E玫瑰花環(huán)試驗 121
實驗二十二 SAP酶標法測定T細胞亞群 125
實驗二十三 單向混合淋巴細胞反應 130
實驗二十四 細胞毒性T細胞活性測定 135
第四篇 抗體制備
實驗二十五 多克隆抗體的制備 143
實驗二十六 多克隆抗體的純化 147
實驗二十七 單克隆抗體制備 153
實驗二十八 單鏈抗體(scFv)的構(gòu)建 162
第五篇 常用的免疫相關(guān)疾病動物模型
實驗二十九 豚鼠的過敏性休克反應模型 175
實驗三十 Ⅰ型超敏反應小鼠模型——被動皮膚過敏反應 181
實驗三十一 Ⅱ型超敏反應豚鼠模型——Forssman皮膚血管炎反應 186
實驗三十二 Ⅲ型超敏反應動物模型——Arthus反應 190
實驗三十三 Ⅳ型超敏反應小鼠模型——二硝基氟苯誘導的遲發(fā)型變態(tài)反應 194
實驗三十四 小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎的誘導 198
第六篇 免疫學標記技術(shù)
實驗三十五 酶聯(lián)免疫吸附試驗 207
實驗三十六 間接免疫熒光法 212
實驗三十七 免疫膠體金技術(shù)——測定HBsAg的試紙條雙抗體夾心法 216
實驗三十八 化學發(fā)光免疫標記技術(shù)檢測乳腺癌患者HER 2 胞外結(jié)構(gòu)域(ECD) 221
實驗三十九 生物發(fā)光技術(shù) 229
第七篇 細胞凋亡的檢測技術(shù)和流式細胞術(shù)
實驗四十 細胞凋亡的DNA瓊脂糖凝膠電泳分析 237
實驗四十一 流式細胞儀檢測細胞凋亡——Annexin V/PI雙染色法 243
實驗四十二 流式細胞術(shù)檢測小鼠T淋巴細胞亞群(CD4+/CD8+T細胞) 248
實驗四十三 流式細胞術(shù)檢測CD4+T細胞上CXCR4的表達 257
實驗四十四 流式細胞儀檢測巨噬細胞胞內(nèi)細胞因子 262
第八篇 糖免疫技術(shù)
實驗四十五 IgG糖鏈檢測 271
實驗四十六 免疫球蛋白A1糖鏈的檢測 275
實驗四十七 細胞表面N糖蛋白的代謝標記及檢測 280
實驗四十八 胞內(nèi)O-GlcNAc糖蛋白的標記及檢測 284
主要參考文獻 289
附錄 293
附錄一 常用試劑和培養(yǎng)液 294
附錄二 實驗常用小鼠的品系及模型 307
Contents
Chapter One Antigen and Antibody Reaction in vitro
1.1 Classical Antigen and Antibody Reaction in vitro 3
1.1.1 Agglutination Reaction 7
Exp.1 Direct Agglutination Reaction — Slide Agglutination Test for Blood Type Detection 7
Exp.2 Indirect Agglutination Reaction — Latex Agglutination Test for Detection of RF 12
Exp.3 Indirect Agglutination Inhibition Reactions — Indirect Latex Agglutination Inhibition Test for the HCG Pregnancy Test 16
1.1.2 Precipitation Reaction 20
Exp.4 Countercurrent Electrophoresis 20
Exp.5 Immunoelectrophoresis 25
1.1.3 Antigen and Antibody Reaction Involved by Complement 29
Exp.6 Assay of Complement Lectin Pathway 29
Exp.7 Hemolytic Plaque Assay 35
1.2 Assay of Functional Cytokine and Immunoglobin 39
Exp.8 Human Serum Specific IgE (SIgE) Assay for Anaphylaxis 42
1.3 HLA Typing Techniques 45
Exp.9 HLA Typing for B27 with PCR SSP 49
Chapter Two Isolation of Immune Cells
2.1 Separation and Purification of Immune Cells 55
Exp.10 Separation of Mononuclear Cells from Whole Peripheral Blood 58
Exp.11 Preparation of Mouse Bone Marrow Derived Macrophages 62
Exp.12 Isolation of Mouse Peritoneal Macrophages 66
Exp.13 Generation Isolation of Dendritic Cells 71
Exp.14 Isolation of Natural Killer Cells 77
Exp.15 Isolation of T Cell from Mouse Spleen Using Magnetic Beads 85
Exp.16 Isolation and Purification of B Cells by Nylon Wool 91
Exp.17 Isolation and Purification of B Cells by MACS 96
Exp.18 Isolation and Purification of Murine Alveolar Macrophages 100
Exp.19 Isolation of Immune Cells from the Mouse Intestinal Immune System 107
Chapter Three Assay for the Functions of Immune Cells
Exp.20 Mouse Spleen NK Cells Activity Assay 118
Exp.21 Erythrocyte Rosette Forming Cell Test (ERFC) for Guinea Pig T Cells 123
Exp.22 Detection of T Lymphocyte Subgroups in Peripheral Blood by the SAP 127
Exp.23 One way Mixed Lymphocyte Reaction 132
Exp.24 Measurement of CTL Activity 137
Chapter Four Preparation of Antibody
Exp.25 Preparation of Polyclonal Antibody 145
Exp.26 Purification of Polyclonal Antibody 150
Exp.27 Preparation of Monoclonal Antibody 157
Exp.28 Generation of scFv 167
Chapter Five Animal Models of Immuno related Diseases
Exp.29 Model of Anaphylaxis Shock in Guinea Pig 178
Exp.30 Murine Model of Type Ⅰ Hypersensitivity Reaction—Passive Cutaneous Anaphylaxis Model 183
Exp.31 Guinea Pig Type Ⅱ Hypersensitivity Reaction—Forssman Cutaneous Vasculitis Response 188
Exp.32 Rabbit Type Ⅲ Hypersensitivity Reaction—Arthus Reaction 192
Exp.33 Mouse Type Ⅳ Hypersensitivity Reaction—Dinitrofluorobenzene induced Delayed Type Hypersensitivity 196
Exp.34 Induction of Mouse Experimental Autoimmune Encephalomyelitis 201
Chapter Six Immunolabeling Technique
Exp.35 Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 209
Exp.36 Indirect Immunofluorescence Assay 214
Exp.37 HBsAg Test Trip by Double Antigen Sandwich Immune Colloidal Gold Strip Technique 218
Exp.38 Detection of HER 2 Extracellular Domain of Breast Cancer Patients by Chemiluminescence Immunoassay 225
Exp.39 Bioluminescence Assay 232
Chapter Seven Flow Cytometry and Cell Apoptosis Detection Technique
Exp.40 Thymocytes Apoptosis Assay by Agar