乳酸菌誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡機(jī)制研究

第一章結(jié)腸癌及乳酸菌功能關(guān)系概述

第一節(jié)引言

一、結(jié)腸癌簡(jiǎn)介

二、結(jié)腸癌發(fā)病癥狀

三、乳酸菌抑制結(jié)腸癌的可能途徑

第二節(jié)人結(jié)腸癌的發(fā)病原因

一、結(jié)腸癌發(fā)病原因簡(jiǎn)述

二、環(huán)境化學(xué)物質(zhì)誘發(fā)的結(jié)腸癌

三、飲食因素誘發(fā)的結(jié)腸癌

四、細(xì)菌酶誘發(fā)的結(jié)腸癌

第三節(jié)乳酸菌調(diào)控機(jī)體免疫功能

一、乳酸菌對(duì)非特異性免疫功能的影響

二、乳酸菌對(duì)特異性免疫功能的影響

三、乳酸菌激活機(jī)體的抗腫瘤免疫

第二章乳酸菌抗結(jié)腸癌功能研究進(jìn)展

第一節(jié)乳酸菌抗結(jié)腸癌作用的機(jī)理

一、乳酸菌降低食源性致癌物質(zhì)的毒性

二、乳酸菌抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)及誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡

三、乳酸菌對(duì)潛在致癌物質(zhì)致癌作用的阻斷

四、乳酸菌對(duì)飲食誘發(fā)結(jié)腸癌作用的阻斷

第二節(jié)乳酸菌不同菌體成分抗結(jié)腸癌作用機(jī)理

一、乳酸菌的菌體細(xì)胞抗結(jié)腸癌作用研究

二、乳酸菌的菌體細(xì)胞壁抗結(jié)腸癌作用研究

三、乳酸菌的菌體細(xì)胞質(zhì)抗結(jié)腸癌作用研究

四、乳酸菌的菌體代謝產(chǎn)物抗結(jié)腸癌作用研究

第三節(jié)乳酸菌與線粒體凋亡信號(hào)途徑

一、活性氧族

二、線粒體凋亡途徑

第四節(jié)國(guó)內(nèi)開展的課題相關(guān)研究

第三章乳酸菌抗腫瘤研究技術(shù)方法

第一節(jié)乳酸菌抗腫瘤研究設(shè)施、材料

一、實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備

二、實(shí)驗(yàn)所用試劑與藥品

三、實(shí)驗(yàn)所用菌株與細(xì)胞

四、實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)液

第二節(jié)乳酸菌抗腫瘤研究檢測(cè)方法

一、對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖抑制能力的測(cè)定

二、乳酸菌對(duì)人腸道上皮細(xì)胞黏附性能的測(cè)定

三、乳酸菌對(duì)酸耐受能力的測(cè)定

四、乳酸菌對(duì)膽鹽耐受能力的測(cè)定

五、乳酸菌16S rDNA 的鑒定

六、蛋白濃度的測(cè)定

七、乳酸菌肽聚糖分子量的檢測(cè)

八、乳酸菌肽聚糖氨基酸組成分析

九、乳酸菌菌體和肽聚糖的形態(tài)學(xué)觀察

十、HT-29細(xì)胞毒性的測(cè)定

十一、HT-29細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

十二、HT-29細(xì)胞DNA損傷的測(cè)定

十三、HT-29細(xì)胞凋亡與壞死的測(cè)定

十四、HT-29細(xì)胞周期的測(cè)定

十五、HT-29細(xì)胞線粒體膜電位的測(cè)定

十六、HT-29細(xì)胞ROS的檢測(cè)

十七、HT-29細(xì)胞線粒體和胞漿中細(xì)胞色素C的檢測(cè)

十八、HT-29細(xì)胞總RNA的提取

十九、體外反轉(zhuǎn)錄合成及RT-PCR反應(yīng)

二十、HT-29細(xì)胞總蛋白提取與蛋白含量的測(cè)定

二十一、HT-29細(xì)胞總蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳

二十二、Western blot分析

第四章乳酸菌抗腫瘤核心技術(shù)研究

一、抗結(jié)腸癌功能乳酸菌菌株的體外篩選

二、抗結(jié)腸癌功能乳酸菌菌體成分的篩選

三、乳酸菌肽聚糖對(duì)HT-29細(xì)胞的抑制作用

四、乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡途徑的研究

五、乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡線粒體途徑研究

六、數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析

第五章抗結(jié)腸癌功能乳酸菌的篩選

第一節(jié)引言

第二節(jié)基于抑制HT-29細(xì)胞增殖能力篩選抗結(jié)腸癌
乳酸菌

第三節(jié)基于乳酸菌的益生功能篩選抗結(jié)腸癌功能乳酸菌

一、乳酸菌黏附于腸上皮細(xì)胞的能力

二、乳酸菌對(duì)模擬胃液的耐受能力

三、乳酸菌對(duì)模擬小腸液的耐受能力

第四節(jié)乳酸菌菌種鑒定

第五節(jié)本章小結(jié)

第六章抗結(jié)腸癌功能乳酸菌菌體成分的篩選

第一節(jié)引言

第二節(jié)乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)的提取及蛋白含量測(cè)定

一、考馬斯亮藍(lán)G-250標(biāo)準(zhǔn)曲線

二、乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

第三節(jié)基于抑制HT-29細(xì)胞增殖能力篩選乳酸菌
菌體成分
一、乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)對(duì)HT-29細(xì)胞增殖的抑制

二、乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)對(duì)HT-29細(xì)胞的毒性作用

第四節(jié)基于誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞DNA損傷篩選乳酸菌
菌體成分

一、單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

二、瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)

第五節(jié)基于誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡篩選乳酸菌菌體成分

一、乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞的凋亡

二、乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)對(duì)HT-29細(xì)胞膜電位的影響

三、乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)對(duì)HT-29細(xì)胞周期的影響

四、乳酸菌細(xì)胞壁和細(xì)胞質(zhì)對(duì)HT-29細(xì)胞形態(tài)學(xué)的
影響

第六節(jié)乳酸菌細(xì)胞壁對(duì)正常細(xì)胞毒性影響

第七節(jié)本章小結(jié)

第七章乳酸菌肽聚糖對(duì)HT-29細(xì)胞抑制作用

第一節(jié)引言

第二節(jié)乳酸菌肽聚糖對(duì)HT-29細(xì)胞增殖的抑制

一、5-氟尿嘧啶對(duì)HT-29的毒性作用

二、MTT實(shí)驗(yàn)

三、臺(tái)盼藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)

第三節(jié)乳酸菌肽聚糖理化性質(zhì)分析

一、乳酸菌肽聚糖蛋白含量的測(cè)定

二、乳酸菌肽聚糖分子量的測(cè)定

三、乳酸菌肽聚糖氨基酸組成及含量

四、掃描電鏡觀察乳酸菌肽聚糖形態(tài)

五、透射電鏡觀察乳酸菌肽聚糖形態(tài)

第四節(jié)乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡

一、HE染色

二、Hoechst熒光染色

三、透射電鏡觀察乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞線
粒體的損傷

四、乳酸菌肽聚糖對(duì)HT-29細(xì)胞周期的影響

五、乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡

第五節(jié)乳酸菌肽聚糖對(duì)正常細(xì)胞毒性影響

第六節(jié)本章小結(jié)

第八章肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡途徑研究

第一節(jié)引言

第二節(jié)乳酸菌肽聚糖對(duì)HT-29細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的
影響

一、HT-29細(xì)胞總RNA的提取

二、乳酸菌肽聚糖對(duì)HT-29細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的影響

三、乳酸菌肽聚糖對(duì)HT-29細(xì)胞Cyto-C基因表達(dá)的
影響

第三節(jié)乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡機(jī)制研究

一、乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞線粒體膜電位的
損失

二、乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞ROS的堆積

三、乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞線粒體Cyto-C的
釋放

四、乳酸菌肽聚糖誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的
變化

第四節(jié)本章小結(jié)

總結(jié)

展望

參考文獻(xiàn)