分子生物學實驗：實用操作技術與應用案例

前言 上篇 實驗操作技術 第一章 核酸分析與分子克隆技術 一、用PCR擴增目的DNA片段 二、瓊脂糖凝膠電泳 三、DNA片段的回收 四、用乙醇沉淀法濃縮DNA樣品 五、目的DNA片段的連接 六、感受態(tài)細胞的制備 七、質粒DNA的轉化 八、質粒DNA的提取 九、質粒的酶切 十、利用Gateway技術構建植物表達載體 十一、Southern雜交分析 第二章 蛋白質分析技術 一、植物組織總蛋白提取及含量的測定 二、聚丙烯酰胺凝膠電泳 三、Western blotting分析 叫、Far Western blotting分析 五、重組蛋白的表達和純化技術 六、蛋白兔抗的制備 七、蛋白互作分析實驗技術 第三章 農桿菌介導的植物轉基因操作技術 一、原理 二、實驗操作流程 第四章 基因差異表達分析技術 一、抑制消減雜交 二、cDNA芯片雜交 第五章 DNA與蛋白互作分析技術 一、染色質免疫共沉淀技術 二、凝膠阻滯分析技術 下篇 應用實例 第六章 通路克隆技術入門載體的改造 一、含有Rubisco小亞基啟動子和葉綠體基質定位序列的通路克隆入門載體的構建 二、通路克隆入門載體pEN-L4*-PrbcS-*T-GFP-L3*的構建 三、通路克隆入門載體pENTR*-T-GFP的構建及功能驗證 第七章 用Gateway技術構建目的基因的光誘導型植物表達載體 一、光誘導型GFP基因植物表達載體的構建 二、光誘導型Gus基因植物表達載體的構建 三、光誘導型hps/phi融合基因植物表達載體的構建 四、擬南芥細胞質型蘋果酸脫氫酶基因AMDH光誘導型植物表達載體的構建 第八章 用Gateway技術構建目的基因的組成型植物表達載體 一、GFP基因植物組成型表達載體的構建 二、短芽孢桿菌甲醛脫氫酶基因植物表達載體的構建 三、大豆14-3-3a基因（SGF14a）植物表達載體的構建 第九章 用Gateway技術構建目的基因與報告基因融合植物表達載體 一、大豆轉錄因子GmbH[．H30與GFP融合基因植物表達載體的構建 二、擬南芥RCA啟動子和熒光素酶基因LUC融合表達載體的構建及應用 第十章 用Gateway技術構建目的基因的RNAi干擾植物表達載體 蠶豆PPlc基因抑制表達載體的構建與應用 第十一章 用Gateway技術構建串聯(lián)兩個目的基因表達盒的植物表達載體 二羥基丙酮合成酶和二羥基丙酮激酶基因表達盒串聯(lián)的植物表達載體構建 第十二章 用經典的酶切連接技術構建目的基因的植物表達載體 一、檸檬酸合成酶基因cs光誘導型植物表達載體pPZP21111-PrbcS刪的構建 二、芹菜絲氨酸乙酰轉移酶基因的植物表達載體構建 第十三章 利用植物表達載體轉化植物及轉基因植物表型分析 一、用GFt，和Gus植物表達載體產生轉基因植物及轉基因的整合與表達分析 二、用植物表達載體pK2-35S-PrbcS-*T-has/phi轉化天竺葵獲得轉基因植株及表型分析 三、用植物表達載體pK-35S-PrbcS-*T-DAK-PROLD-PrbcS-*T-DAS轉化擬南芥獲得轉基因植株及表型分析 四、用植物表達載體一pPZP211一PrbcS一cs轉化煙草獲得轉基因植株及表型分析 五、用植物表達載體p1300一Surperpromoter-AgSAT轉化煙草及轉基因植株表型分析 六、利用CS和PEPC的表達載體產生雙轉基因煙草及表型分析- 第十四章 原核表達載體的構建和應用 一、惡臭假單胞菌谷胱甘肽一非依賴型甲醛脫氫酶的原核表達載體的構建和應用 二、黑大豆醛脫氫酶基因原核表達載體的構建和應用 第十五章 酵母表達載體的構建及應用 AtHSFAid基因在酵母中的表達與功能分析 第十六章 利用ssH cDNA文庫技術分析基因的差異表達 一、噴施甲醇的蠶豆葉片中上調表達基因的分離與鑒定 二、甲醛脅迫擬南芥葉片中下調表達基因的分離與鑒定 第十七章 利用DNA芯片技術分析基因的差異表達 一、用擬南芥全基因組芯片雜交分析基因的差異表達 二、用大豆全基因組芯片雜交分析基因的差異表達 第十八章 利用免疫共沉淀技術分析體內蛋白與蛋白之間的的相互作用 一、用免疫共沉淀分析鋁脅迫下大豆根中14-3-3蛋白對質膜H+-ATPase活性的調控 二、用免疫共沉淀分析煙草質膜H+-ATPase與14-3-3蛋白的互作對干旱脅迫的應答 三、用免疫共沉淀分析云南紅梨果皮轉錄因子MYB、bHLH和WD40的互作模式 第十九章 利用雙分子熒光技術分析植物體內轉錄因子間的相互作用 在洋蔥表皮細胞中驗證PyMYB、PybHLH和PyWD40之間的相互模式 第二十章 用：Pulldown和Far Western blot技術做體外實驗分析蛋白質之間的互作 PyMYB、PybHLH和PyWD40重組蛋白之間互作模式分析 第二十一章 用chIP分析植物體內轉錄因子和啟動子的結合 一、云南紅梨果皮MYB轉錄因子結合花青素結構基因啟動子元件的分析 二、甲醇和乙醇刺激對煙草轉錄因子RSG與GA200x1啟動子結合的影響 第二十二章 利用。EMSA技術做體外實驗分析轉錄因子和基因啟動子元件的結合 EMSA分析在體外ayMyB與花青素合成結構基因啟動子的結合 第二十三章 利用PcR技術篩選擬南芥的T-DNA插入突變體 一、擬南芥SHMIY純合T-DNA插入突變體的篩選 二、擬南芥HY5純合T-DNA插入突變體的篩選 三、擬南芥bHLH30純合T-DNA插入突變體的篩選 參考文獻 附錄 一、常用抗生素貯存液配制方法 二、常用培養(yǎng)基的配制 三、常用菌種的特性 四、常用質粒載體圖譜 五、轉基因生物表型常見生理生化指標的分析方法