抗體偶聯(lián)藥物

《新生物學(xué)叢書》叢書序
前言
第1章  抗體偶聯(lián)藥物研發(fā)進(jìn)展 1
摘要 1
1  引言 2
2  抗體偶聯(lián)藥物的構(gòu)成 4
2.1  抗體偶聯(lián)藥物的定義 4
2.2  抗體偶聯(lián)藥物識(shí)別的靶點(diǎn)/抗原 5
2.3  細(xì)胞毒素藥物和連接子 6
2.4  抗體的選擇 7
3  目前抗體偶聯(lián)藥物的臨床研究結(jié)果 8
3.1  維布妥昔單抗(Brentuximab Vedotin/Adcetris?)臨床概況 8
3.2  曲妥珠-美坦新衍生物(T-DM1)臨床概況 9
3.3  CMC-544 (Inotuzumab Ozogamicin)臨床概況 11
3.4  早期臨床試驗(yàn)中的其他抗體偶聯(lián)藥物 12
4  挑戰(zhàn)與前景 15
致謝 17
參考文獻(xiàn) 17
第2章  抗體偶聯(lián)藥物靶標(biāo)選擇：關(guān)鍵因素 25
摘要 25
1  引言 25
2  靶標(biāo)選擇的關(guān)鍵因素 25
2.1  特異性 25
2.2  表達(dá)水平 26
2.3  內(nèi)化 26
2.4  靶標(biāo)的異質(zhì)性 26
2.5  可及性 27
3  在靶標(biāo)選擇中需考慮的相關(guān)因素 27
3.1  鑒別合適的病患群 27
3.2  靶抗原調(diào)節(jié) 27
4  實(shí)例分析：前列腺特異性膜抗原 27
4.1  特異性 27
4.2  表達(dá)水平 28
4.3  內(nèi)化 29
4.4  異質(zhì)性 30
4.5  可及性 30
4.6  鑒定合適的病患群 31
4.7  靶標(biāo)的表達(dá)是否可調(diào) 32
5  結(jié)論 33
參考文獻(xiàn) 33
第3章  抗體偶聯(lián)藥物中抗體的選擇：內(nèi)化和細(xì)胞內(nèi)定位 36
摘要 36
1  引言 36
2  材料 37
2.1  流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)內(nèi)化所需試劑 37
2.2  細(xì)胞內(nèi)定位檢測(cè)所需試劑 37
3  方法 38
3.1  流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)內(nèi)化 38
3.2  細(xì)胞內(nèi)定位檢測(cè) 39
4  注意事項(xiàng) 41
參考文獻(xiàn) 42
第4章  抗體偶聯(lián)藥物的負(fù)載 43
摘要 43
1  引言 43
2  美登素類化合物 44
3  澳瑞他汀類 47
4  卡奇霉素 49
5  毒傘肽 51
參考文獻(xiàn) 53
第5章  抗體偶聯(lián)藥物的連接子技術(shù) 60
摘要 60
1  引言 60
2  化學(xué)不穩(wěn)定的連接子 61
2.1  酸不穩(wěn)定的連接子(腙類) 61
2.2  二硫化物連接子 65
3  酶催化裂解的連接子 67
3.1  肽連接子 67
3.2  β-葡糖苷酸連接子 70
4  不可裂解的連接子 71
5  偶聯(lián)考量事項(xiàng) 74
6  結(jié)論 75
參考文獻(xiàn) 76
第6章  藥物-接頭穩(wěn)定性的體內(nèi)水平檢測(cè) 85
摘要 85
1  引言 85
2  材料 87
2.1  活體動(dòng)物階段 87
2.2  ELISA分析 88
2.3  TFC-MS/MS分析 88
3  方法 89
3.1  PK研究 89
3.2  ELISA：偶聯(lián)抗體和總抗體 89
3.3  TFC-MS/MS游離藥物的分析 91
3.4  PK分析 91
4  注意事項(xiàng) 91
致謝 94
參考文獻(xiàn) 95
第7章  抗體偶聯(lián)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)和ADME表征 97
摘要 97
1  引言 97
2  ADC的藥代動(dòng)力學(xué) 98
3  ADC PK鑒定的分析物選擇和關(guān)鍵參數(shù) 98
3.1  清除 99
3.2  分布容積 100
4  ADC優(yōu)化與開發(fā)中PK的應(yīng)用 100
5  ADC PK解釋 101
6  ADC ADME鑒定 102
6.1  ADC連接子在血漿中的穩(wěn)定性 102
6.2  ADC組織分布 103
6.3  ADC分解代謝/代謝和消除 103
6.4  體外DDI評(píng)估 104
7  結(jié)論 105
致謝 105
參考文獻(xiàn) 105
第8章  生物制藥環(huán)境下細(xì)胞毒性化合物的安全操作 109
摘要 109
1  引言 109
2  ADC的工藝 109
3  ADC的有效負(fù)載——細(xì)胞毒性藥物 110
4  操作人員的職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn) 111
5  風(fēng)險(xiǎn)降低措施 113
5.1  暴露控制 113
5.2  工作環(huán)境的監(jiān)控 114
5.3  個(gè)人的保護(hù)裝備 114
5.4  泄露 115
5.5  廢棄物管理 115
6  結(jié)論 115
致謝 116
參考文獻(xiàn) 116
第9章  針對(duì)腫瘤靶向的細(xì)胞毒性藥物與抗體鉸鏈區(qū)巰基之間基于馬來(lái)酰亞胺的
小試、中試規(guī)模偶聯(lián) 118
摘要 118
1  引言 118
2  材料 120
2.1  實(shí)驗(yàn)室供應(yīng)和設(shè)備 120
2.2  試劑 122
3  方法 122
3.1  利用馬來(lái)酰亞胺 PEG作為替代藥物的模擬偶聯(lián) 122
3.2  小試(5 mg)規(guī)模的ADC制備 124
3.3  150 mg規(guī)模的ADC制備 130
3.4  HIC測(cè)定藥物抗體偶聯(lián)比(DAR) 133
3.5  聚體的SE-HPLC分析 133
3.6  DAR的LC-MS測(cè)定 133
4  注釋 134
參考文獻(xiàn) 137
第10章  通過(guò)賴氨酸的偶聯(lián)方法 139
摘要 139
1  引言 139
2  材料 140
3  方法 141
3.1  一步法偶聯(lián) 141
3.2  采用O-琥珀酰亞胺試劑的進(jìn)行兩步法偶聯(lián) 143
3.3  采用亞氨基硫烷試劑進(jìn)行兩步法偶聯(lián) 148
4  注釋 149
參考文獻(xiàn) 149
第11章  基于巰基反應(yīng)性連接子的位點(diǎn)特異性偶聯(lián)：改造THIOMAB 152
摘要 152
1  引言 152
2  材料 153
2.1  位點(diǎn)特異性突變 153
2.2  THIOMAB 153
2.3  偶聯(lián) 153
2.4  疏水相互作用色譜(HIC)和質(zhì)譜(LC-MS)分析 154
2.5  細(xì)胞表面結(jié)合 154
2.6  體外活性 154
3  方法 155
3.1  定點(diǎn)突變 155
3.2  在HEK293細(xì)胞中的小量THIOMAB生產(chǎn) 155
3.3  與含反應(yīng)性巰基連接子的偶聯(lián) 156
3.4  定量 157
3.5  改造ADC的細(xì)胞表面結(jié)合 159
3.6  改造ADC的體外活性 160
4  注意事項(xiàng) 160
參考文獻(xiàn) 162
第12章  抗體的細(xì)菌谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶修飾 164
摘要 164
1  引言 164
2  材料 166
2.1  抗體和底物 166
2.2  去糖基化 166
2.3  酶偶聯(lián) 166
2.4  抗體重鏈突變 166
2.5  質(zhì)譜分析 167
3  方法 167
3.1  IgG1的去糖基化 167
3.2  BTGase催化偶聯(lián) 167
3.3  定點(diǎn)突變以及去糖基化IgG1的制備 167
3.4  質(zhì)譜在反應(yīng)質(zhì)控中的運(yùn)用 168
4  注意事項(xiàng) 169
致謝 171
參考文獻(xiàn) 171
第13章  抗體偶聯(lián)藥物的制劑處方研發(fā) 172
摘要 172
1  引言 172
2  ADC質(zhì)量屬性的工藝過(guò)程考量 174
3  ADC制劑處方開發(fā)的考慮因素 174
3.1  物理穩(wěn)定性 175
3.2  化學(xué)穩(wěn)定性 175
4  穩(wěn)定性指示方法 177
4.1  藥物抗體偶聯(lián)比率(DAR)的測(cè)定 177
4.2  反相高效液相色譜法(RP-HPLC)檢測(cè)未偶聯(lián)的小分子藥物 177
4.3  分子排阻高效液相色譜法(SE-HPLC)分析分子大小異質(zhì)性 178
4.4  非還原CE-SDS法分析分子大小異質(zhì)性 179
4.5  活性效價(jià) 180
5  影響ADC制劑處方開發(fā)的生物物理因素 180
6  配伍研究和臨床注射 182
7  制劑處方的決策 182
參考文獻(xiàn) 182
第14章  偶聯(lián)工藝的開發(fā)和放大 185
摘要 185
1  ADC工藝開發(fā)：為何、如何？ 185
2  熟悉工藝過(guò)程 186
3  尋找理想的工藝參數(shù)：利用DoE作為工具 187
3.1  制訂實(shí)驗(yàn)計(jì)劃 188
3.2  使用DoE 進(jìn)行參數(shù)篩選的例子 188
4  工藝參數(shù)的驗(yàn)證 191
5  規(guī)模放大到克級(jí)水平及純化工藝的開發(fā) 191
6  臨床供應(yīng) 192
7  通向商業(yè)化進(jìn)程的挑戰(zhàn) 193
致謝 193
參考文獻(xiàn) 194
第15章  納米載體偶聯(lián)抗體的方法 195
摘要 195
1  引言 195
2  材料 196
2.1  糖修飾組分 196
2.2  胺或羧酸修飾組分 196
2.3  巰基偶聯(lián)組分 196
3  方法 197
3.1  通過(guò)高碘酸氧化的糖修飾 197
3.2  通過(guò)碳二亞胺的氨基或羧基修飾 199
3.3  通過(guò)巰基偶聯(lián) 200
4  注釋 204
致謝 205
參考文獻(xiàn) 205
第16章  紫外/可見分光光度法(UV/Vis)測(cè)定藥物抗體偶聯(lián)比率(DAR) 210
摘要 210
1  引言 210
2  材料 212
3  方法 212
3.1  測(cè)定藥物最大吸收λ(D) 212
3.2  測(cè)定抗體和藥物在280 nm和最大吸收λ(D)處的消光系數(shù)(ε) 212
3.3  獲取ADC樣品的吸收光譜 213
3.4  計(jì)算ADC的平均DAR 213
4  注意事項(xiàng) 213
致謝 214
參考文獻(xiàn) 214

第17章  利用疏水作用色譜和反相高效液相色譜法測(cè)定藥物抗體偶聯(lián)比率(DAR)
 和藥物負(fù)荷分配 216
摘要 216
1  引言 216
2  材料 218
2.1  儀器設(shè)備 218
2.2  HIC 218
2.3  RP-HPLC 218
3  方法 218
3.1  HIC 218
3.2  RP-HPLC 220
4  注意事項(xiàng) 222
參考文獻(xiàn) 223
第18章  用LC-ESI-MS測(cè)量藥物抗體偶聯(lián)比(DAR)和藥物分布 224
摘要 224
1  引言 224
2  材料 225
2.1  設(shè)備 225
2.2  試劑 225
3  方法 226
3.1  樣品制備 226
3.2  LC-ESI-MS分析 226
3.3  DAR和藥物分布的計(jì)算 228
4  注意事項(xiàng) 229
致謝 229
參考文獻(xiàn) 230
第19章  成像毛細(xì)管等電聚焦測(cè)定電荷異質(zhì)性和未偶聯(lián)抗體水平 232
摘要 232
1  引言 232
2  材料 233
3  方法 234
4  注意事項(xiàng) 236
參考文獻(xiàn) 237
第20章  用于測(cè)定抗體偶聯(lián)藥物(ADC)生產(chǎn)中的可萃取物/可溶出物的基于風(fēng)險(xiǎn)的
科學(xué)方法 238
摘要 238
1  引言 238
2  基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的科學(xué)方法 239
3  可萃取物和可溶出物研究運(yùn)行方案 241
4  結(jié)論 243
致謝 243
參考文獻(xiàn) 243
索引 245
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