生物化學(xué)技術(shù)原理及應(yīng)用（第五版）

第五版前言
第四版前言
第三版前言
第一編概述

第一章 生命大分子物質(zhì)的制備
第一節(jié) 材料的選擇與處理
一、材料的選擇
二、材料的處理
第二節(jié) 測(cè)定方法的確立
一、目的與要求
二、常用的測(cè)定方法
第三節(jié) 細(xì)胞破碎
一、機(jī)械破碎
二、溶脹和自溶
三、化學(xué)處理
四、生物酶降解
第四節(jié) 抽提
一、抽提的含義
二、抽提有效成分的影響因子
第五節(jié) 濃縮
一、沉淀法
二、吸附法
三、超過(guò)濾法
四、透析法
五、離心法
六、干燥法
第六節(jié) 純化方案的設(shè)計(jì)與評(píng)價(jià)
一、純化方案的設(shè)計(jì)
二、純化方案的評(píng)價(jià)
第七節(jié) 有效成分純度和性質(zhì)的分析
第八節(jié) 應(yīng)用實(shí)例
一、高純度人轉(zhuǎn)鐵蛋白的制備
二、葉綠體的提取與45SRNA的制備
三、細(xì)菌質(zhì)粒DNA的提取
思考題
參考文獻(xiàn)
第二編純化方法

第二章 沉淀法
第一節(jié) 基本原理與沉淀類型
一、基本原理
二、制備蛋白質(zhì)
三、制備核酸
第二節(jié) 應(yīng)用實(shí)例
一、脾磷酸二酯酶的純化
二、細(xì)菌染色體DNA的制備
三、蔗糖酶的初步純化
思考題
參考文獻(xiàn)

第三章 吸附層析
第一節(jié) 吸附柱層析
一、常用術(shù)語(yǔ)
二、基本原理
三、吸附劑
四、洗脫液
五、層析柱的制備與層析操作
六、應(yīng)用與實(shí)例
第二節(jié) 薄層層析
一、操作及注意事項(xiàng)
二、應(yīng)用實(shí)例
第三節(jié) 聚酰胺薄膜層析
一、基本原理
二、應(yīng)用實(shí)例
思考題
參考文獻(xiàn)

第四章 疏水層析
第一節(jié) 基本原理
一、疏水作用
二、吸附劑
第二節(jié) 操作與應(yīng)用
一、層析柱的制備
二、加樣與洗脫
三、應(yīng)用實(shí)例
思考題
參考文獻(xiàn)

第五章 離子交換層析
第一節(jié) 基本原理
第二節(jié) 離子交換劑的分類及性質(zhì)
一、分類
二、性質(zhì)
第三節(jié) 離子交換劑與緩沖液的選擇
一、離子交換劑的選擇
二、緩沖液的選擇
三、加樣量的確定
第四節(jié) 操作
一、離子交換劑的處理、再生和轉(zhuǎn)型
二、分離物質(zhì)的交換
三、物質(zhì)的洗脫與收集
第五節(jié) 應(yīng)用
一、制備、純化生命物質(zhì)
二、測(cè)定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)
思考題
參考文獻(xiàn)

第六章 凝膠過(guò)濾
第一節(jié) 凝膠的分類及性質(zhì)
一、葡聚糖凝膠
二、瓊脂糖凝膠
三、聚丙烯酰胺凝膠
四、Sephacryl
五、Superdex
第二節(jié) 基本原理
第三節(jié) 操作
一、凝膠的選擇和處理
二、凝膠柱的制備
三、加樣與洗脫
四、凝膠柱的再生及保存
第四節(jié) 應(yīng)用
一、脫鹽和濃縮
二、分離生命物質(zhì)
三、去除熱源物質(zhì)
四、測(cè)定分子質(zhì)量
五、其他
思考題
參考文獻(xiàn)

第七章 親和層析
第一節(jié) 基本原理
第二節(jié) 操作
一、載體的選擇
二、配體的選擇
三、親和吸附劑的制備
四、特異性吸附
五、分離大分子物質(zhì)
六、親和層析柱的再生
第三節(jié) 提高吸附劑的操作容量
一、在配體和載體間引入“手臂”
二、增加配體取代的程度
三、配體與載體衍生物以最少的鍵連接
四、載體多孔性的影響
五、其他
第四節(jié) 應(yīng)用實(shí)例
一、純化大分子物質(zhì)
二、研究酶的結(jié)構(gòu)與功能
三、實(shí)例
思考題
參考文獻(xiàn)

第八章 聚焦層析
第一節(jié) 基本原理
一、多緩沖劑和多緩沖交換劑
二、聚焦層析原理
第二節(jié) 操作
一、多緩沖劑的選擇
二、多緩沖交換劑用量的確定
三、多緩沖交換劑的處理
四、樣品的準(zhǔn)備
五、加樣和洗脫
六、樣品中多緩沖劑的去除
第三節(jié) 應(yīng)用
一、分離模型蛋白質(zhì)
二、分離復(fù)雜物質(zhì)
三、鑒定某些酶的性質(zhì)
思考題
參考文獻(xiàn)

第九章 高效液相色譜
第一節(jié) 基本原理
一、高效液相色譜儀
二、固定相
第二節(jié) 反相高效液相色譜
一、固定相、流動(dòng)相和色譜柱
二、純化糖基化白蛋白肽片段
第三節(jié) 應(yīng)用
一、定性和定量分析
二、測(cè)定酶活性
三、測(cè)定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量
四、分離核酸和蛋白質(zhì)
思考題
參考文獻(xiàn)

第十章 固定化的酶與微生物
第一節(jié) 制備方法
一、固定化酶
二、固定化微生物
三、生物傳感器
第二節(jié) 制品的性質(zhì)
一、酶的相對(duì)活性
二、活性曲線與最適pH
三、穩(wěn)定性
四、米氏常數(shù)
五、其他
第三節(jié) 應(yīng)用實(shí)例
一、工業(yè)方面
二、醫(yī)學(xué)方面
三、生化分析方面
四、應(yīng)用實(shí)例
思考題
參考文獻(xiàn)
第三編鑒定方法

第十一章 標(biāo)記
第一節(jié) 核酸標(biāo)記
一、基本原理
二、標(biāo)記方法
第二節(jié) 蛋白質(zhì)標(biāo)記
一、機(jī)制
二、類型
三、標(biāo)記物制備
第三節(jié) 標(biāo)記物的純化與鑒定
一、標(biāo)記物純化
二、探針的鑒定
第四節(jié) 應(yīng)用實(shí)例
一、cDNA組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)
二、激酶的磷酸化和脫磷酸化
三、蛋白質(zhì)半衰期的測(cè)定
思考題
參考文獻(xiàn)

第十二章 重組DNA
第一節(jié) 重組DNA的部件
一、工具酶
二、載體
三、目的基因
第二節(jié) 重組
一、黏性末端連接法
二、平端連接法
三、平黏連接法
四、TA連接法
五、同聚物加尾連接法
六、人工接頭連接法
第三節(jié) DNA擴(kuò)增
一、重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞
二、重組子的篩選與鑒定
三、表達(dá)產(chǎn)物的純化
第四節(jié) 應(yīng)用實(shí)例
一、分離總RNA和mRNA
二、反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA
三、PCR擴(kuò)增及其產(chǎn)物純化
四、PCR產(chǎn)物的克隆
五、重組質(zhì)粒的提取及分析
思考題
參考文獻(xiàn)

第十三章 DNA序列測(cè)定
第一節(jié) 雙脫氧鏈終止法
一、基本原理
二、載體系統(tǒng)
三、測(cè)序試劑
四、測(cè)序操作
五、變性電泳
六、序列讀取
第二節(jié) PCR法
一、直接測(cè)序
二、循環(huán)測(cè)序
三、應(yīng)用實(shí)例
第三節(jié) 化學(xué)降解法
一、測(cè)序原理
二、具體操作
第四節(jié) 新一代測(cè)序法
一、第二代測(cè)序法
二、第三代測(cè)序法
思考題
參考文獻(xiàn)

第十四章 生物芯片
第一節(jié) 基因芯片
一、基本原理和工作流程
二、制備及操作
三、應(yīng)用實(shí)例
第二節(jié) 蛋白質(zhì)芯片
一、原理及特點(diǎn)
二、制備與操作
三、應(yīng)用實(shí)例
第三節(jié) 芯片實(shí)驗(yàn)室
一、結(jié)構(gòu)與制作
二、應(yīng)用實(shí)例
思考題
參考文獻(xiàn)

第十五章 聚合酶鏈反應(yīng)
第一節(jié) 基本原理及操作系統(tǒng)
一、擴(kuò)增DNA
二、擴(kuò)增RNA
第二節(jié) PCR的類型
一、普通PCR
二、原位PCR
三、反轉(zhuǎn)錄PCR
四、反向PCR
五、不對(duì)稱PCR
六、巢式PCR
七、彩色PCR
第三節(jié) 應(yīng)用
一、篩選目的基因
二、直接測(cè)序
三、標(biāo)記DNA探針
四、尋找新基因
五、檢測(cè)血液和組織成分
六、檢測(cè)環(huán)境中的致病菌與指示菌
思考題
參考文獻(xiàn)

第十六章 電泳
第一節(jié) 基本原理
一、泳動(dòng)度概念
二、影響泳動(dòng)度的因子
第二節(jié) 聚丙烯酰胺凝膠電泳
一、基本原理
二、不連續(xù)垂直板狀和柱狀凝膠電泳
三、連續(xù)的垂直板凝膠的電泳
四、線性和階梯式梯度的板狀凝膠電泳
五、雙向電泳
第三節(jié) 瓊脂糖凝膠電泳
一、緩沖液的配制
二、瓊脂糖膠板的制備
三、加樣和電泳
四、觀察
第四節(jié) 應(yīng)用
一、測(cè)定分子質(zhì)量
二、測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)
三、鑒定微量物質(zhì)
四、診斷疾病（轉(zhuǎn)移電泳）
思考題
參考文獻(xiàn)

第十七章 免疫分析
第一節(jié) 抗體的性質(zhì)、制備及純化
一、抗體的性質(zhì)
二、多克隆抗體的制備
三、單克隆抗體的制備
四、抗體的檢測(cè)
五、抗體的純化
第二節(jié) 抗原抗體反應(yīng)與應(yīng)用
一、凝集反應(yīng)
二、免疫擴(kuò)散
三、免疫電泳
四、固相免疫吸附（含ELISA）
五、免疫微球測(cè)定
思考題
參考文獻(xiàn)

第十八章 氣相色譜
第一節(jié) 基本原理
一、常用術(shù)語(yǔ)
二、塔板與速率理論
第二節(jié) 氣相色譜儀的構(gòu)造
一、載氣流速的控制和測(cè)量
二、進(jìn)樣系統(tǒng)
三、恒溫室
四、色譜柱
五、檢定器
第三節(jié) 操作
一、操作要點(diǎn)
二、條件的選擇
第四節(jié) 定性和定量檢測(cè)
一、定性檢測(cè)
二、定量檢測(cè)
第五節(jié) 應(yīng)用
一、分析蛋白質(zhì)和氨基酸
二、分析核酸
三、分析糖類物質(zhì)
四、分析脂肪酸
五、分析農(nóng)藥
思考題
參考文獻(xiàn)

第十九章 分光光度法
第一節(jié) 基本原理
一、光譜
二、物質(zhì)結(jié)構(gòu)與光譜的關(guān)系
三、光吸收的基本規(guī)律——比爾朗伯定律
第二節(jié) 分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)及類型
一、主要結(jié)構(gòu)
二、類型
第三節(jié) 應(yīng)用
一、定性分析
二、含量測(cè)定
三、參數(shù)測(cè)定
四、物質(zhì)結(jié)構(gòu)的分析
思考題
參考文獻(xiàn)

第二十章 離心法
第一節(jié) 基本原理
一、沉降現(xiàn)象
二、離心力
三、離心法
四、沉降系數(shù)
第二節(jié) 離心機(jī)的類型及構(gòu)造
一、制備型離心機(jī)
二、分析型離心機(jī)
第三節(jié) 應(yīng)用
一、離心機(jī)的操作概述
二、應(yīng)用實(shí)例
三、測(cè)定沉降系數(shù)
四、分離純化生命物質(zhì)
思考題
參考文獻(xiàn)
參考文獻(xiàn)
附錄
中英文縮寫(xiě)詞