遺傳工程概論（第2版）

第一章 引言
一、遺傳工程的概念
二、遺傳工程的發(fā)展概況
三、遺傳工程所需的微生物學原理
（一）大腸桿菌的一般特性
（二）抗生素抗性
（三）細菌細胞的生長
第二章 遺傳工程的載體
一、質(zhì)粒載體
（一）質(zhì)粒的復制
1.質(zhì)粒的復制起始和控制
2.質(zhì)粒的不相容性
（二）質(zhì)粒的改造
（三）目前常用的質(zhì)粒載體
1.帶有多克隆位點的質(zhì)粒
2.帶有噬菌體啟動子的質(zhì)粒
3.表達質(zhì)粒
二、單鏈噬菌體克隆載體
（一）M13噬菌體
（二）α互補
（三）M13及其寄主的改造
（四）噬菌粒
三、雙鏈噬菌體克隆載體
（一）入噬菌體的基因組結(jié)構(gòu)與侵染
1.λ噬菌體的生活周期
2.λ噬菌體的基因組結(jié)構(gòu)
3.λ噬菌體的侵染
（二）λ噬菌體載體的構(gòu)建
1.生物學制約
2.載體的通用性
3.體外包裝
四、粘粒載體
第三章 DNA的提取
一、原核生物染色體DNA的提取
二、原核生物染色體外DNA的分離
三、質(zhì)粒DNA的快速提取
四、真核生物染色體DNA的提取
五、DNA濃度和純度的光學分析
第四章 遺傳工程的酶學基礎(chǔ)
一、限制性內(nèi)切酶
（一）寄主的限制和修飾
（二）限制性內(nèi)切酶的類別
1.第一類限制性內(nèi)切酶
2.第二類限制性內(nèi)切酶
3.第三類限制性內(nèi)切酶
（三）限制性內(nèi)切酶的純化
（四）限制性內(nèi)切酶反應(yīng)的終止
二、DNA聚合酶
（一）E.coliDNA聚合酶I
（二）E.coliDNA聚合酶I的Klenow片段
（三）T4DNA聚合酶
（四）天然的T7DNA聚合酶
（五）修飾的T7DNA聚合酶
（六）TaqDNA聚合酶和反轉(zhuǎn)錄酶
三、依賴于DNA的RNA聚合酶
四、DNA及RNA的修飾酶
（一）末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶
（——）T4多核苷酸激酶
（三）堿性磷酸酶
五、核酸酶
（一）DNA酶I
（二）Bal31核酸酶
（三）S1核酸酶
（四）外切核酸酶III
（五）核糖核酸酶H
第五章 凝膠電泳和雜交分析
一、凝膠電泳
（一）基本原理
（二）DNA的可見性
（三）電泳圖譜
（四）凝膠系統(tǒng)
（五）實驗條件對凝膠電泳的影響
（六）指示染料和加樣緩沖液
（七）DNA分子大小的確定
（八）DNA的回收
二、雜交分析
（一）Southern吸印和雜交分析
（二）Northern吸印和雜交分析
（三）Western印跡檢測技術(shù)
（四）DNA的斑點雜交
（五）探針的制備
1．缺口平移法
2．隨機引物法
3．液體閃爍計數(shù)
4．非放射性探針
（六）DNA芯片技術(shù)
第六章 DNA的連接
一、大腸桿菌DNA連接酶和T4DNA連接酶
二、DNA片段在體外的連接
（一）粘性末端的連接
（二）平齊末端的連接
（三）非互補末端的連接
（四）接頭的使用
1．1inker
2．a(chǎn)daptor
三、影響連接反應(yīng)的因素
四、提高連接反應(yīng)效率的兩項措施
第七章 細菌轉(zhuǎn)化
一、細菌轉(zhuǎn)化的原理
二、細菌轉(zhuǎn)化的方法
（一）簡便、快速的感受態(tài)制備和轉(zhuǎn)化方法
（二）標準的高效轉(zhuǎn)化法
（三）“超級感受態(tài)”細胞的制備和轉(zhuǎn)化
（四）菌落轉(zhuǎn)化法
（五）X1776的轉(zhuǎn)化方法
（六）電擊轉(zhuǎn)化
三、轉(zhuǎn)化的評估指標
（一）轉(zhuǎn)化效率（轉(zhuǎn)化頻率）
（二）感受態(tài)細胞的比例
第八章 理想克隆的鑒定
一、表現(xiàn)型的鑒定
（一）利用抗生素進行篩選
（二）利用顯色進行篩選
二、限制性作圖分析
（一）限制性作圖
（二）限制性分析與Southern雜交相結(jié)合
三、菌落和噬菌斑的原位雜交
（一）菌落原位雜交
（二）噬菌斑原位雜交
（三）原位雜交的優(yōu)越性和進一步的鑒定
四、用PCR擴增目的片段
五、免疫檢測法
（一）用免疫檢測法篩選表達文庫的過程
1．篩選噬菌斑構(gòu)成的表達文庫
2．篩選菌落構(gòu)成的表達文庫
（二）關(guān)于免疫檢測法的幾個問題
1．多克隆抗體和單克隆抗體
2．多克隆抗體的來源
3．第一抗體的檢測
4．第二抗體的來源
5．對酶促發(fā)色法和放射化學法進行比較
6．對堿性磷酸酶與抗體的偶聯(lián)物和辣根過氧化物酶與抗體的偶聯(lián)物進行比較
7．誘導外源蛋白表達的時間
六、酵母人工染色體文庫的篩選
（一）YAC基因組文庫的保存
（二）YAC基因組文庫的篩選方法
（三）構(gòu)建、貯存和篩選的分工
（四）篩選YAC文庫的流程
第九章 克隆基因在大腸桿菌細胞中的表達
一、外源基因在大腸桿菌細胞中表達的原理和技術(shù)
（一）表達系統(tǒng)的選擇
1．蛋白質(zhì)的大小
2．蛋白質(zhì)的活性
3．蛋白質(zhì)的需要量
（二）啟動子的選擇
1．乳糖操縱子的啟動子（1acUV5啟動子）
2．色氨酸啟動子（trp啟動子）
3．乳糖操縱子和色氨酸操縱子的復合啟動子（tac或trc啟動子）
4．噬菌體T7啟動子
（三）融合蛋白質(zhì)的表達
1．融合蛋白質(zhì)表達的特點和載體
……
第十章 cDNA文庫技術(shù)
第十一章 基因組文庫的構(gòu)建
第十二章 DNA的序列分析
第十三章 聚合酶鏈式反應(yīng)
第十四章 克隆化DNA的定點誘變
第十五章 圖位克隆法
第十六章 釀酒酵母的遺傳工程
第十七章 植物基因工程
第十八章 哺乳動物的基因工程
第十九章 用重組DNA技術(shù)生產(chǎn)藥物