分子生物學(xué)基本技能和策略

第一篇 基因工程原理
概論
0?1分子生物學(xué)概述
0?2基因工程概述
0?3基因重組技術(shù)的應(yīng)用前景
第1章 分離目的基因和基因載體
1?1目的基因的獲取
1?2基因載體的選擇
第2章 限制性內(nèi)切核酸酶的應(yīng)用
2?1概念
2?2序列特征
2?3作用方式
2?4同裂酶和同尾酶
2?5影響酶切活性的主要因素
第3章 目的基因和基因載體的體外連接
3?1DNA連接酶
3?2連接方式
第4章 重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞
4?1受體細(xì)胞的選擇
4?2重組基因的導(dǎo)入方法
4?3轉(zhuǎn)化細(xì)胞的擴(kuò)增
第5章 重組體陽性克隆的篩選
5?1遺傳檢測(cè)法
5?2物理檢測(cè)法
5?3菌落雜交篩選法
5?4免疫化學(xué)檢測(cè)法
5?5DNA-蛋白篩選法
5?6PCR法確定重組體
5?7DNA序列分析
5?8真核宿主細(xì)胞的篩選標(biāo)記
第6章 外源基因表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)
6?1宿主細(xì)胞
6?2表達(dá)載體
6?3表達(dá)產(chǎn)物和表達(dá)水平
6?4表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)
6?5表達(dá)蛋白質(zhì)的分離純化
第二篇 常用生化技術(shù)原理
第1章 電泳技術(shù)
1?1電泳基本原理
1?2影響泳動(dòng)度的主要因素
1?3常用的電泳方法
第2章 層析技術(shù)
2?1概述
2?2層析原理
2?3柱層析法
2?4凝膠過濾層析法
2?5氣相色譜和高效液相色譜
第3章 分光光度技術(shù)
3?1光學(xué)原理
3?2Lambert-Beer定律
3?3分光光度計(jì)的基本構(gòu)造
3?4紫外可見光分光光度計(jì)
3?5熒光分光光度計(jì)
3?6酶標(biāo)儀
第4章 離心分析法
4?1離心機(jī)基本原理
4?2離心機(jī)的分類
4?3離心機(jī)的結(jié)構(gòu)
4?4離心方法
第5章 透析
5?1透析膜(袋)
5?2溶劑
5?3物理?xiàng)l件
第三篇 分子生物學(xué)常用技術(shù)
第1章 目的基因和基因載體的分離
實(shí)驗(yàn)1 質(zhì)粒DNA的提取
實(shí)驗(yàn)2 真核生物基因組DNA的提取
實(shí)驗(yàn)3 DNA的瓊脂糖凝膠電泳
實(shí)驗(yàn)4 DNA的定量分析
實(shí)驗(yàn)5 PCR基因擴(kuò)增
實(shí)驗(yàn)6 哺乳動(dòng)物DNA的純化與鑒定
實(shí)驗(yàn)7 基因組DNA文庫的建立
第2章 酶切與連接
實(shí)驗(yàn)1 限制性內(nèi)切核酸酶的酶切與鑒定
實(shí)驗(yàn)2 載體與目的基因的連接
第3章 重組DNA的轉(zhuǎn)化與篩選
實(shí)驗(yàn)1 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌及初步篩選
實(shí)驗(yàn)2 核酸探針的制備和標(biāo)記
實(shí)驗(yàn)3 原位雜交法進(jìn)行重組質(zhì)粒的篩選
實(shí)驗(yàn)4 Northern雜交
實(shí)驗(yàn)5 真核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)染和篩選
實(shí)驗(yàn)6 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
第4章 外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)
實(shí)驗(yàn)1 在大腸桿菌（E.coli）表達(dá)蛋白產(chǎn)物
實(shí)驗(yàn)2 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
實(shí)驗(yàn)3 蛋白質(zhì)雜交法檢測(cè)表達(dá)蛋白
附:常用生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)
實(shí)驗(yàn)1 不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳
實(shí)驗(yàn)2 凝膠過濾法測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量
實(shí)驗(yàn)3 透析實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)4 雙縮脲反應(yīng)
實(shí)驗(yàn)5 胰島素及腎上腺素對(duì)血糖含量的影響
實(shí)驗(yàn)6 血糖含量測(cè)定
實(shí)驗(yàn)7 蛋白質(zhì)定量測(cè)定
第四篇 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本操作和數(shù)據(jù)
第1章 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器設(shè)備
1?1實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)儀器及設(shè)施
1?2離心機(jī)室的裝備
1?3分析儀器室的設(shè)置
1?4核素實(shí)驗(yàn)室
1?5細(xì)胞培養(yǎng)室
1?6暗室
1?7冷室
第2章 實(shí)驗(yàn)室基本操作
2?1玻璃儀器的洗滌
2?2攪拌和振蕩
2?3容量玻璃儀器的使用方法
2?4分光光度計(jì)的使用
2?5干燥箱和恒溫箱
2?6電熱恒溫水浴
2?7酸度計(jì)
第3章 實(shí)驗(yàn)室常用數(shù)據(jù)
第4章 常用載體圖譜
主要參考文獻(xiàn)